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INVESTIGACIÓN ORIGINAL / ORIGINAL RESEARCH Calle-Vilca M. et al.
Actividad antimicrobiana del extracto hidroalcohólico de hojas de
Piper callosum Ruiz & Pav. frente a cepas bacterianas y fúngicas in vitro
Visionarios en ciencia y tecnología 2025; 10:70-76
mediante estudios que permitan determinar la actividad
antimicrobiana de extractos de Piper callosum frente a
patógenos de alta prevalencia clínica.
El presente estudio tuvo como objetivo evaluar la
actividad antimicrobiana del extracto hidroalcohólico
de hojas de Piper callosum Ruiz & Pav. contra
cepas de Staphylococcus aureus, Escherichia coli,
Pseudomonas aeruginosa y Candida albicans
mediante métodos in vitro, aportando así conocimiento
relevante para su potencial aplicación farmacéutica y
biomédica.
MATERIAL Y METODOS
El presente estudio fue de tipo experimental y se
desarrolló in vitro con el propósito de evaluar la actividad
antimicrobiana del extracto hidroalcohólico de hojas de
Piper callosum Ruiz & Pav. frente a microorganismos
bacterianos y fúngicos de referencia clínica. Las hojas
fueron recolectadas de manera manual en la región
amazónica de Pucallpa, especícamente en el caserío
San Francisco, perteneciente a la comunidad Shipibo.
Posteriormente, el material vegetal fue sometido a
un proceso de selección en el cual se descartaron las
hojas dañadas, deterioradas o que presentaban signos
de contaminación. Las hojas aptas se lavaron con agua
destilada y se dejaron secar a temperatura ambiente en
un ambiente sombreado durante diez días, con el n
de preservar su integridad química. Una vez secas, se
trituraron hasta obtener un polvo no homogéneo que
facilitara una extracción eciente.
El extracto fue obtenido mediante un procedimiento
de maceración con agitación intermitente utilizando
una solución hidroalcohólica. Para ello, 50 g del
material vegetal molido fueron sometidos a contacto
con 500 mL de un sistema hidroalcohólico compuesto
por etanol y agua en proporción 70:30 (v/v).
Posteriormente, la preparación se dejó en maceración
durante 72 horas a temperatura ambiente, efectuándose
agitaciones periódicas para favorecer la transferencia
de los compuestos hacia el solvente. Finalizado el
tiempo de maceración, la mezcla se ltró utilizando
papel Whatman Nº 1 y posteriormente se concentró
en un rotaevaporador a 40 °C bajo presión reducida
hasta obtener un extracto denso. El extracto seco
fue almacenado en frascos ámbar herméticamente
cerrados y conservado a 4 °C hasta su uso. Para los
ensayos antimicrobianos, el extracto fue reconstituido
empleando el mismo sistema hidroalcohólico utilizado
en la maceración, preparándose tres concentraciones:
100, 200 y 400 mg/mL.
Los microorganismos empleados en esta
investigación fueron cepas de referencia ATCC,
ampliamente utilizadas en estudios microbiológicos:
Staphylococcus aureus ATCC 25923, Escherichia coli
ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853
y Candida albicans ATCC 10231.Todas las cepas se
conservaron en refrigeración dentro del rango de 2
a 8 °C hasta su utilización, tras lo cual se procedió
a su reactivación mediante cultivos previos con una
duración de 24 horas. Con el n de estandarizar
las condiciones experimentales, cada suspensión
microbiana fue ajustada a una turbidez equivalente a
0,5 McFarland, correspondiente aproximadamente a
1–2 × 108 UFC/mL.
La actividad antimicrobiana del extracto frente a los
microorganismos evaluados fue analizada mediante dos
técnicas microbiológicas complementarias tales como
la difusión en disco y difusión en pocillo. En ambas
metodologías, la inoculación se realizó de manera
uniforme sobre la supercie del medio de cultivo
empleando hisopos previamente impregnados con los
inóculos estandarizados. En la técnica de difusión en
disco, discos estériles de 6 mm de diámetro fueron
impregnados con 20 μL de cada concentración del
extracto y posteriormente colocados sobre la supercie
del agar Mueller–Hinton para las bacterias y del agar
Sabouraud para Candida albicans. En el método de
difusión en pocillo, posteriormente, se generaron
cavidades uniformes en el medio de cultivo inoculado,
las cuales fueron empleadas para la aplicación de 50
μL del extracto en evaluación. En todos los ensayos
se emplearon controles positivos correspondientes a
antibióticos o antifúngicos de referencia y controles
negativos consistentes en la mezcla hidroalcohólica
utilizada como solvente. La incubación de los cultivos
se realizó a 37 °C, considerando tiempos diferenciados
según el microorganismo evaluado: 24 horas para
las bacterias y 48 horas para el hongo. Transcurrido
el tiempo de incubación, se midieron los diámetros
de los halos de inhibición con un calibrador digital
y los resultados se registraron en milímetros. Cada
ensayo experimental se realizó en tres repeticiones
independientes para asegurar la conabilidad y
reproducibilidad de los datos generados.
Los datos generados fueron procesados utilizando
estadística descriptiva e inferencial, expresándose
los diámetros de inhibición en términos de media
y desviación estándar. Posteriormente, se aplicó
un análisis de varianza (ANOVA) a n de poder
evaluar las diferencias entre las concentraciones
ensayadas del extracto. Cuando el ANOVA mostró